幽门螺杆菌(HP.CagA)-磁微粒化学发光法（AE/AP）解决方案

摘自《体检人群幽门螺杆菌血清学检测专家共识》

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, Hp)是一种革兰氏阴性杆菌，是危害人类健康最常见的病原体之一。1994年，世界卫生组织(WHO)将Hp定义为Ⅰ类致癌因子。2021年，美国公共卫生机构将Hp列为新增的致癌物，进一步引起我国公众对Hp感染的重视，随之增加了在健康体检中检测Hp的意向。此外，Hp感染还与慢性胃炎、消化性溃疡、黏膜相关淋巴组织(mucosaassociated lymphoid tissue, MALT)淋巴瘤等疾病的发生密切相关。我国人群的Hp感染率仍然维持高位(～50%)，多数感染者并无明显消化道症状或相关并发症，类似"健康带菌状态"，实际上感染者的胃黏膜可能已经发生慢性炎症，甚至出现萎缩、肠化等癌前状态。

按照我国最新版的《第六次全国幽门螺杆菌感染处理共识报告》，对于Hp的诊断方法推荐尿素呼气试验、单克隆粪便抗原试验和血清学检测方法。国际Hp马斯特里赫特Ⅳ共识亦指出，血清学检测方法是唯一一个不受胃内细菌定植状况影响的检测方法，尤其在胃内Hp细菌数量少的时候，其他检测方法会出现假阴性，而血液中针对Hp抗原、特别是CagA等特异性抗原的抗体水平相对稳定，不受感染程度和治疗的影响，更易于检测。

Hp马斯特里赫特Ⅴ共识亦强调，经过当地验证高度准确的血清学试验可用于非侵入性Hp感染诊断。Hp的CagA和VacA蛋白是重要致病因子，检测血清抗CagA、VacA抗体，可以评价Hp菌株的毒力水平。

Hp血清学检测具有操作简单、适用范围广、成本效益高等优势，常用于Hp流行病学调查研究。随着人们对Hp认识的不断深入，Hp毒力分型检测已被广泛应用于体检人群，尤其是处于胃癌高发地区、有胃癌家族史及40岁以上的体检人群。通过对Hp分型检测，有助于判定感染Hp的不同毒力水平，在体检人群中发现CagA和VacA阳性Hp感染的高风险人群意义重大，可以促进对于该类人群Hp感染的早诊早治，进而降低Hp相关消化道疾病特别是胃癌的发生率。

Hp毒力因子CagA和VacA抗体检测 Hp致病基于其可以产生多种毒力因子，随着Hp致病机理研究的进展，新的毒力因子不断被发现。大量的研究结果表明，在目前众多Hp的毒力因子中，CagA和VacA最具临床指导意义。《中国幽门螺杆菌根除与胃癌防控的专家共识意见》指出，CagA和VacA是Hp最为重要的毒力因子。根据是否表达CagA和(或)VacA这两种毒力因子可将Hp分为Ⅰ型和Ⅱ型，Ⅰ型Hp菌株CagA和/或VacA蛋白表达阳性，为致病性较强的产细胞毒素菌株，Ⅱ型Hp菌株CagA和VacA蛋白均不表达，为不产生主要毒力因子的菌株。

鉴于Hp的UreA(尿素酶 A)、UreB(尿素酶B)、CagA和VacA蛋白等Hp结构成分或毒力蛋白，被Hp分泌产生后可以刺激机体免疫系统产生相应的血清抗体，借助血清Hp相关抗体可以反映受检者的Hp感染情况，从而实现对Hp的毒力分型。

西宝生物开发的高质量幽门螺旋杆菌(CagA)重组抗原，可应用于体外诊断幽门螺杆菌抗体IgG/IgM检测试剂盒开发，适用于化学发光等多种应用场景，助力肠道研究防控无"幽"。

针对细胞毒素相关蛋白A(CagA)的检测，西宝生物推出1种CagA抗原及鼠抗人IgG单抗。具体配对方式如下（以下评估仅代表在西宝生物的工艺体系下的验证，建议客户根据自身工艺进行更为详细的验证）。

2.2化学发光（AP）平台-双抗原夹心法

选取NMPA获证试剂为参考系统。对西宝生物（AE）与参考系统的CagA测值结果分别根据其参考值（西宝生物（AE）：COI≥1为阳性，COI＜1为阴性；参考系统：≥6为阳性，＜6为阴性）进行阴阳性判定，并对判定结果进行四格表分析，结果如下：

灵敏度：24/29×100%=82.8%

特异性：47/50×100%=94%

符合率：（24+47）/79×100%=91.1%

图1为AE平台检测临床样本发光值分布，CagA阴性组发光值均值与CagA阳性组发光值均值能够明显区分。由表1数据可得，3例假阳性样本及5例假阴样本均落在参考系统的cutoff附近，属于灰区，需要用第三方试剂进行确认。西宝生物AE组合与参考系统的灵敏度大于80%，特异性及符合率大于90%，说明两种试剂的临床符合率较高。

选取NMPA获证试剂为参考系统。对西宝生物（AP）与参考系统的CagA测值结果分别根据其参考值（西宝生物（AP）：COI≥1为阳性，COI＜1为阴性；参考系统：≥6为阳性，＜6为阴性）进行阴阳性判定，并对判定结果进行四格表分析，结果如下：

灵敏度：25/29×100%=86.2%

特异性：47/50×100%=94%

符合率：（25+47）/79×100%=91.1%

图2为AP平台检测临床样本发光值分布，CagA阴性组发光值均值与CagA阳性组发光值均值能够明显区分。由表2数据可得，3例假阳性样本及4例假阴样本均落在参考系统的cutoff附近，属于灰区，需要用第三方试剂进行确认。西宝生物AP组合与参考系统的灵敏度大于85%，特异性及符合率大于90%，说明两种试剂的临床符合率较高。

样本:样品加样量10ul；

试剂1：HP CagA抗原（货号：EDD0033C）包被-磁珠稀释物，用量50ul/测试；

试剂2：鼠抗人IgG单抗（货号：EKN0255B）标记-吖啶酯稀释物，用量50ul/测试；

反应条件：

第一步：10ul样本+50ul试剂1混合，37℃孵育5min，清洗；

第二步：加入50ul试剂2，37℃孵育5min，清洗；

第二步：加入预激发液及激发液，进行测试。

样本:样品加样量10ul；

试剂1：HP CagA抗原（货号：EDD0033C）包被-磁珠稀释物，用量50ul/测试；

试剂2：HP CagA抗原（货号：EDD0033C）标记-碱性磷酸酶稀释物，用量50ul/测试；

反应条件：

第一步：10u样本+50ul试剂1+50ul试剂2+混合，37℃孵育10min，清洗；

第二步：加入底物，进行测试。

西宝生物研发团队还筛选出优质的配对抗体为幽门螺杆菌抗原检测试剂盒开发者保驾护航。