重组PNGase糖苷酶（冻干）

【产品描述】

PNGase F是一种酰胺酶，切割糖蛋白上的N-连接糖，切割的糖型有：高甘露糖、杂合和复杂寡糖，切割位点为：内侧的N-乙酰葡糖胺（GlcNAc）和天冬酰胺之间。使得糖蛋白释放以天冬酰胺连接的糖分子，并使得天冬酰胺转化为天冬氨酸本公司PNGase是E.coli重组表达，并经多步纯化制备的重组蛋白。可以提供不含甘油形式，便于在HPLC方法中取得较佳作用。

【酶活定义】

一个单位是指10μL的反应体系中，37°℃反应1小时从10μg变性RNase B中除去超过95%的碳水化合物所需要的酶量。

【组成成分】

【使用方法 仅供参考】

复溶

将装有 PNGase F 的离心管 100-200g离心 2min，小心开盖，加入纯水，使得终浓度为 500U/ul，上下颠倒尽量混匀，混匀后100-200g 离心 2min。复溶后的 PNGase F长期应储存于-20℃，尽量避免反复冻融，可储藏6个月。

变性酶切

1、用去离子水溶解1-20μg糖蛋白，加入1μl 10×变性缓冲液，并用去离子水定溶至10μl。100℃孵育10 min。

转移至冰上，并离心10s。

2、 加入2μl 10×糖苷酶切缓冲液，2μl 10%NP-40,5μl去离子水，混匀。

3、加入1μl 复溶后的PNGase F，37°℃孵育60 min，进行SDS-PAGE或HPLC分析。

非变性酶切

1、用去离子水溶解1-20μg糖蛋白，加入1μl10×糖苷酶切缓冲液，2-4μl复溶后的 PNGase F，并用去离子水定溶至10μl，

37℃孵育2h-过夜。

2、进行SDS-PAGE或HPLC分析。

【注意事项】

本品复溶后尽量避免反复冻融；

变性酶切的效率较高，应先进行尝试。如果遇到无法进行变性酶切(例如变性过程中出现沉淀),可尝试非变性酶切，但酶切效率可能会下降，建议增加酶量并延长酶切时间。

使用时请穿实验服并佩戴一次性手套；