重组糖苷酶PNGaseF
- 别名：N-糖酰胺酶F；N-糖苷酶F
- 编码：ECE0441E
- 级别：
- 简介：PNGase F是一种酰胺酶，切割糖蛋白上的N-连接糖，切割的糖型有：高甘露糖、杂合和复杂寡糖，切割位点为：最内侧的N-乙酰葡糖胺（GlcNAc）和天冬酰胺之间。应用于抗体和糖蛋白的N-糖基完全去除。
基础信息
| CAS | 83534-39-8 |
| 来源 | 伊丽莎白菌 E.coli重组表达 |
| 纯度 | >95% |
| 酶存储缓冲液 | 20mM Tris-HCl,100mM NaCl,5mM EDTA,50%Glycerol,pH=7.7 |
| 组成成分 | PNGase F；10×变性缓冲液；10×糖苷酶缓冲液；10%NP-40 |
| 存储温度 | -20℃ |
| 有效期 | 12个月 |
| 应用 | 抗体和糖蛋白的N-糖基完全去除 |
产品介绍
【产品描述】
PNGase F是一种酰胺酶，切割糖蛋白上的N-连接糖，切割的糖型有：高甘露糖、杂合和复杂寡糖，切割位点为：最内侧的N-乙酰葡糖胺（GlcNAc）和天冬酰胺之间。使得糖蛋白释放以天冬酰胺连接的糖分子，并使得天冬酰胺转化为天冬氨酸本公司PNGase是E.coli重组表达，并经多步纯化制备的重组蛋白。可以提供不含甘油形式，便于在HPLC方法中取得最佳效果。
【酶活定义】
一个单位是指10μL的反应体系中，37°℃反应1小时从10μg变性RNase B中除去超过95%的碳水化合物所需要的酶量。
【组成成分】
组分 | 规格1 | 规格2 |
PNGase F | 20KU | 40KU |
10×变性缓冲液 | 200uL | 200uL |
10×糖苷酶切缓冲液 | 200uL | 200uL |
10% NP-40 | 200uL | 200uL |
【使用方法 仅供参考】
变性酶切
1、用去离子水溶解1-20μg糖蛋白，加入1μl10×变性缓冲液，并用去离子水定溶至10μl。100℃孵育10 min。
转移至冰上，并离心10s。
2、 加入2μl 10×糖苷酶切缓冲液，2μl 10%NP-40,5μl去离子水，混匀。
3、加入1μl PNGase F，37°℃孵育60 min，进行SDS-PAGE或HPLC分析。
非变性酶切
1、用去离子水溶解1-20μg糖蛋白，加入1μl10×糖苷酶切缓冲液，2-4μl PNGase F，并用去离子水定溶至10μl，
37℃孵育2h-过夜。
2、进行SDS-PAGE或HPLC分析。
【注意事项】
本品复溶后尽量避免反复冻融；
变性酶切的效率较高，应首先进行尝试。如果遇到无法进行变性酶切(例如变性过程中出现沉淀),可尝试非变性酶切，但酶切效率可能会下降，建议增加酶量并延长酶切时间。
使用时请穿实验服并佩戴一次性手套；
质量指标
MSDS
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