蛋白A（Protein A） 残留检测试剂盒
- 别名：残留蛋白A检测试剂盒 Protein A ELISA kit 蛋白A（Protein A） 残留检测试剂盒
- 编码：DDM1416A
- 级别：
- 简介：抗体类药物生产时多用到的蛋白A（Protein A）亲和层析填料，不可避免会有蛋白A配基脱落，导致抗体药物中蛋白A的残留污染。本试剂盒既可检测天然的protein A，也可检测重组的protein A如MabSelect SuRe等，适用于定量分析生物药物中蛋白A杂质。
基础信息
| 灵敏度 | LOD 10pg/ml, LOQ 10pg/ml |
| 线性 | 在[10-3000]pg/mL的测量范围内，r≥0.9900 |
| 回收率 | 80%-120% |
| 批间差 | ≤10% |
| 特异性 | 既可检测天然的protein A,也可检测重组的protein A |
| 应用 | 适用于定量分析生物药物中蛋白A杂质 |
产品介绍
简介
抗体类药物生产时多用到的蛋白A（Protein A）亲和层析填料，不可避免会有蛋白A配基脱落，导致抗体药物中蛋白A的残留污染。本试剂盒既可检测天然的protein A，也可检测重组的protein A如MabSelect SuRe等，适用于定量分析生物药物中蛋白A杂质。
优势
通常情况下，蛋白A会与待测样品中的单克隆抗体形成复合体从而影响准确的蛋白A测定，与传统方法相比，本试剂盒无需样品预处理步骤，即可检测从IgG中分离的蛋白A，实验简单易操作，且耗时短。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心酶联免疫检测技术测定样品中proteinA的含量。包括校准品，标准品，稀释液，
Biotin标记的检测抗体，清洗液，双组分TMB显色液，终止液，预包被酶标板，封板膜。
使用方法
试剂准备
1.本试剂对水份敏感，在开瓶前，需将各组分小瓶完全平衡至室温，以避免容器内的水份冷凝。
2.清洗液的配制：用蒸馏水或纯化水10倍(1:9)稀释试剂E 清洗液(10X),配制实验用清洗液。长期使用可放于2℃~8℃保存，效期3个月。
3.设置酶标仪，读取波长450nm/630nm的双波长。
4.显色液的配制：双组份TMB显色液由两部分组成：组分A(含H2O2)和组分B(含TMB),分瓶包装，临用前按1:1混合后使用。
5.校准品的配制：检测含有天然或重组Protein A样品时，请参照下表稀释步骤配制出标准曲线：3000.00pg/mL、1500.00pg/mL、800.00pg/mL、320.00pg/mL、128.00pg/mL、51.20pg/mL 、20.48pg/mL、0.00pg/mL。
校准品名称 | 移取 | 加入至 | 配成重组Protein A浓度 |
浓溶液 | 10μL的3μg/mL试剂A校准品 | 990μL的试剂B稀释液，混匀 | 30ng/mL |
校准品H | 40μL的30ng/mL校准品 | 360μL的试剂B稀释液，混匀 | 3000.00pg/mL |
校准品G | 200μL的校准品H | 200μL的试剂B稀释液，混匀 | 1500.00pg/mL |
校准品F | 200μL的校准品G | 175μL的试剂B稀释液，混匀 | 800.00pg/mL |
校准品E | 150μL的校准品F | 225μL的试剂B稀释液，混匀 | 320.00pg/mL |
校准品D | 150μL的校准品E | 225μL的试剂B稀释液，混匀 | 128.00pg/mL |
校准品C | 150μL的校准品D | 225μL的试剂B稀释液，混匀 | 51.20pg/mL |
校准品B | 150μL的校准品C | 225μL的试剂B稀释液，混匀 | 20.48pg/mL |
校准品A | 150μL的试剂B稀释液 | 0.00pg/mL |
6.样品的配制：
通常情况下，Protein A会与待测样品中的抗体形成复合体，而高浓度IgG会影响检测结果，从而影响Protein A的准确测定。因此在测定Protein A之前应当进行样品稀释。推荐用试剂B稀释液，将样品稀释至0.1-1.0mg/mL的蛋白浓度，可尝试将样品10-50倍稀释，或稀释至检测线性范围的浓度进行检测，稀释完的样品体积应不少于150μL。
未提供的必需品
1.具有450nm和630nm双波长检测功能的酶标仪。 (如果酶标仪不能提供双波长分析，也可以仅在450nm波长下读取)。
2.移液器5-200μLg
3.多通道移液器100μL。
4.蒸馏水或纯化水。
5.用于稀释清洗液的500mL容器。
检测操作步骤
1.取所需数量的组份H预包被酶标板条固定于板架上；向孔中加入校准品/待测样品，每孔50μL,每个浓度两个重复；
2.轻轻震荡混匀，贴上组份I封板膜，20-25℃振荡(500rpm)孵育60分钟；
3.洗板：甩净孔中液体，在各反应孔中加入稀释后的实验用清洗液(由试剂E清洗液稀释后配制),每孔300μL,停留5秒钟后甩去孔中液体，重复3次，最后一次甩净拍干。机洗：每孔中注液量为每孔300μL,洗板3次，最后一次拍干；
4.加入试剂C Biotin标记的检测抗体，每孔100μL；
5.轻轻震荡混匀，贴上组份I封板膜，20-25℃振荡(500rpm)孵育60分钟；
6.洗板：甩净孔中液体，在各反应孔中加入稀释后的实验用清洗液(由试剂E清洗液稀释后配制),每孔300μL,停留5秒钟后甩去孔中液体，重复3次，最后一次甩净拍干。机洗：每孔中注液量为每孔300μL,洗板3次，最后一次拍干；
7.加入试剂D链霉亲和素-辣根过氧化物酶复合物，每孔100μL；
8.轻轻震荡混匀，贴上组份I封板膜，20-25℃振荡(500rpm)孵育30分钟；
9.洗板：甩净孔中液体，在各反应孔中加入稀释后的实验用清洗液(由试剂E清洗液稀释后配制)每孔300μL,停留5秒钟后甩去孔中液体，重复3次，最后一次甩净拍干。机洗：每孔中注液量为每孔300μL,洗板3次，最后一次拍干；
10.显色：加入试剂F显色液，每孔100μL,20-25℃,避光孵育8分钟；
11.终止：加入试剂G终止液，每孔100μL,终止反应(此时蓝色立刻转为黄色);
12.测定：用酶标仪在450nm/630nm双波长下，读取各孔的吸光值(O.D.值),如果酶标仪不提供双波长分析，可以仅在450nm波长下读取，测定应在加入终止液后15分钟以内进行。
结果分析与计算
1.校准品、待测样品均做2个重复，取其平均值。
2.用酶标仪的自带软件(通常是四参数逻辑曲线拟合)或使用能够生成四参数逻辑拟合(log-4PL)的计算机软件制作校准品剂量-反应曲线的回归方程，再根据待测样品的O.D.值从回归曲线上返算出样品中待测物的浓度。
3.请勿使用线性回归分析来推导样品浓度，避免导致结果不准。
4.含有大于3000pg/mL的Protein A样品需用所提供的试剂B稀释液稀释后测定。计算结果时，需将稀释后的样品浓度乘以稀释倍数。
质量指标
MSDS
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