O糖蛋白酶

产品描述

O-糖蛋白酶是一种高度特异性的蛋白酶，用于切割糖蛋白或糖肽上的肽键，该酶特异性识别粘蛋白型O-连接糖(无论是否唾液酸化)的丝氨酸或苏氨酸残基，在其N端进行切割。Seebio O糖蛋白酶采用大肠杆菌表达，可产生适用于质谱分析的O-糖肽。该酶含有6X His-Tag,可以方便的在反应后去除。

酶活定义 一个单位是指20uL的反应体系中，37°℃反应2小时在20mM Tris-HCl,pH 8.0溶液中，切割超过90%的2uM O-糖肽所需要的酶量。

 产品组分

储存：本品应储存于-20℃，可保存至少12个月。

运输：干冰运输，活性稳定。

产品应用

O-糖基化位点测定

O-糖结构测定

使用方法(仅供参考)

1) 将10ug糖蛋白与20 mM Tris-HCl pH 8.0,40 mM DTT,0.1%SDS溶液混合，并使得总体积为50ul。

2) 95℃加热10分钟。

3) 冷却至室温。

4) 加入3ul 500mM碘乙酸溶液。

5) 室温放置30分钟，

6) 将溶液转移至超滤离心管中。

7) 12000 ×g离心4分钟，弃去流穿。

8) 加入400ul 20mM Tris-HCl,pH 8.0溶液。

9) 12000×g离心4分钟，弃去流穿。加入400ul 20mM Tris-HCl,pH8.0溶液，重复一次。

10) 加入20ul 20mM Tris-HCl,pH 8.0溶液。

11) 加入1ul O糖蛋白酶，轻柔混匀。

12) 37℃孵育2-18小时。

13) 12000×g离心4分钟，收集上清。

注意事项

本品收到后尽量避免反复冻融；

使用时请穿实验服并佩戴一次性手套；

本品不得直接用于临床诊断和治疗。