Ni NTA 磁珠
- 别名：Ni NTA Magnetic Beads
- 编码：ACQ0171A
- 级别：
- 简介：Ni NTA磁珠，基质为高交联琼脂糖、四氧化三铁纳米颗粒
基础信息
| 中文名 | Ni NTA 磁珠 |
| 英文名 | Ni NTA Beads |
| 基质 | 高交联琼脂糖、四氧化三铁纳米颗粒 |
| 螯合金属离子 | Ni2+ |
| 金属离子密度 | ≥20 μmol/mL 磁珠（100%） |
| 磁珠浓度 | 10% (v / v) |
| 粒径分布 | 40-100 μm |
| 载量 | ≥40 mg/mL 磁珠（100%） |
| 化学稳定性 | 常规水相缓冲液，8 M 尿素，6 M 盐酸胍，1 M 氢氧化钠 |
| 储存条件 | 20%乙醇，2-8℃ |
产品介绍
使用须知
本产品须与磁性分离设备配套使用
磁珠使用前要混合震荡均匀
磁珠预处理要充分
孵育时要保持磁珠处于悬浮状态，以保持最大结合效率
在使用及保存磁珠过程中，禁止磁珠长时间干燥
禁止冷冻，离心磁珠，防止对磁珠产生不可逆的损伤
建议磁珠仅重复纯化同种蛋白，当纯化性能降低时，可进行再生处理
应避免磁珠因磁吸不完全导致的磁珠损耗
使用方法
1. 常用缓冲液
| Binding Buffer | 20 mM Phosphate Buffer, 500 mM NaCl, 20 mM Imidazole, pH8.0 |
| Wash Buffer | 20 mM Phosphate Buffer, 500 mM NaCl, 50 mM Imidazole, pH8.0 |
| Elution Buffer-1 | 20 mM Phosphate Buffer, 500 mM NaCl, 250 mM Imidazole, pH8.0 |
| Elution Buffer-2 | 20 mM Phosphate Buffer, 500 mM NaCl, 500 mM Imidazole, pH8.0 |
| Storage Buffer | 20% (v/v) Ethanol |
缓冲液的配制影响目的蛋白的回收率和纯度，在纯化较大规模蛋白之前，需做好预实验，筛选出适用于目的蛋白的缓冲液体系。
在结合缓冲液中添加少量咪唑可以减少杂蛋白的吸附；洗脱时，不确定最佳洗脱咪唑浓度的情况下，推荐使用不同梯度洗脱，并收集上清液做 SDS-PAGE 电泳验证，确定合适的洗脱浓度。
2. 手动纯化流程
2.1 样品制备
细胞分泌表达的样品直接用Binding Buffer稀释2-3倍，混合均匀备用；
细胞胞内表达的样品，用 Binding Buffer 重悬，按需加入蛋白酶抑制剂（例如：终浓度为 1 mM的 PMSF），搅拌混合均匀，冰浴超声裂解细胞备用。
2.2 磁珠预处理
取一定量磁珠至 EP 管中，置于磁力架上，使磁珠沉降，移除上层的 Storage Buffer，用与Storage Buffer等体积的 Binding Buffer （例如取400ul 10% V/V的磁珠，磁珠体积是40ul， Storage Solution的体积是360ul，这里加入360ul）洗涤 2-3 次，磁性分离后加Binding Buffer调整磁珠体积比为10%，保留磁珠备用。
2.3 结合
将磁珠加入步骤 2.1 的样品中，在室温下使用混合仪或摇床翻转 EP 管，使磁珠充分的分散在样品溶液中，约30 min 后进行磁性分离，移出上清液，留样检测或废弃（对于部分易降解的蛋白，建议在 2~8℃下孵育 1 h 以上）。
2.4 漂洗
在上一步 EP 管中加入与Storage Buffer等体积的 Wash Buffer，翻转重悬磁珠后进行磁性分离，移出上清液，留样检测或废弃，可根据需要配制不同咪唑浓度的漂洗液分步漂洗。
2.5 洗脱
将与Storage Buffer等体积的 Elution Buffer 加入上一步的 EP 管中，在室温下使用垂直混合仪或手动轻柔翻转 EP 管，使磁珠充分的分散，10 min 后进行磁性分离，移取上清液至新 EP 管，可根据需要配制不同咪唑浓度的漂洗液分步漂洗。
注：建议用户在第一次洗脱后再重复洗脱 1-2 次，确保目的蛋白充分回收；微球上 90%结合的目的蛋白在第一次洗脱时会被洗脱，因此，之后的洗脱时间及洗脱液体积均可自定义，翻转混合均匀后磁性分离即可。
2.6 磁珠后处理
使用后的磁珠用 Elution Buffer 洗涤 2 次，磁性分离后移除上清液；之后用去离子水洗
涤 2 次，磁性分离后移除上清液；加入 Storage Solution 使磁珠浓度为 10%（v/v），置于 2-8℃保存。
3. 磁珠再生
Ni NTA Magnetic Beads 琼脂糖磁珠在连续使用 8~10 次后，若出现载量明显下降的现象时，表明螯合的 Ni2+有部分脱落，建议进行再生处理，需准备以下缓冲液。
| Stripping Buffer | 20 mM Phosphate Buffer，500 mM NaCl，100 mM EDTA，pH7.4 |
| Beads Washing Buffer | 0.5 M NaOH，2 M NaCl |
| Recharge Buffer | 100 mM NiSO4 |
具体操作流程如下：
（1）取结合性能降低的磁珠至EP 管中，磁性分离移除上清液，加入3倍磁珠体积的 Stripping Buffer，重悬磁珠，在 37℃摇床内震荡混合 30 min，磁性分离，去除上清液，重复 1 次；
（2）加入3倍磁珠体积的去离子水，手动翻转 EP 管使磁珠重悬，磁性分离后移除上清液，重复 2 次；
（3）加入3倍磁珠体积的 Beads Washing Buffer，在室温下使用垂直混合仪或手动轻柔翻转 EP 管，使磁珠重悬，5 min 后磁性分离移除上清液；加入3倍磁珠体积的去离子水，手动翻转 EP 管使磁珠重悬，磁性分离后移除上清液，重复 3~5 次，至洗涤液呈中性为止；
（4）加入3倍磁珠体积的 Recharge Buffer，在室温下使用垂直混合仪或手动轻柔翻转EP 管，使磁珠重悬，5 min 后磁性分离移除上清液，重复 2 次；用去离子水洗涤磁珠 5 次以上，确保游离的 Ni2+去除完全；
（5）加入 Storage Solution 使磁珠浓度为 10%（v/v），置于 2-8℃保存。
质量指标
MSDS
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