Seebio® 热启动 Taq SYBR Green qPCR预混液(2X)
- 别名:Seebio®Hot Star TaqMan SYBR Green qPCR Master Mix(2X)(Universal)
- 编码:DAA1097A
- 级别:
- 简介:Seebio® 热启动 Taq SYBR Green qPCR预混液(2X) 利用了一种性能增强的Taq DNA聚合酶,通过热启动激活技术进行保护,并优化了qPCR缓冲系统来进行基于SYBR Green I的定量PCR。本混合物在2倍反应浓度下制备,可直接用于稳健、低模板的定量PCR,具有高灵敏度、特异性和可靠性。
基础信息
中文名 | Seebio® 热启动 Taq SYBR Green qPCR预混液(2X) |
英文名 | Seebio®Hot Star TaqMan SYBR Green qPCR Master Mix(2X)(Universal) |
产品介绍
【产品基本信息用途】
Seebio® 热启动 Taq SYBR Green qPCR预混液(2X) 利用了一种性能增强的Taq DNA聚合酶,通过热启动激活技术进行保护,并优化了qPCR缓冲系统来进行基于SYBR Green I的定量PCR。本混合物在2倍反应浓度下制备,可直接用于稳健、低模板的定量PCR,具有高灵敏度、特异性和可靠性。
【产品特点和优势】
² 所用Taq DNA聚合酶经改构和优化,具有热启动、更高灵敏性和更高可靠性;
² 优化的扩增缓冲系统,保障高的扩增信号强度和低模板有效扩增;
² 2×预混液使反应液配制更方便快捷。
【运输、储存条件和有效期】
干冰运输。-20℃保存,有效期2年
【必备主要试剂和仪器】
1.Real Time PCR 扩增仪
2.实验专用反应管或反应板
3.PCR 引物
4.灭菌水
5.微量移液器和枪头(已高压灭菌)
6.ABI 7300/7500/7500 F/StepOnePlus等扩增仪需ROX Reference Dye。
【使用方法】
1. 配制qPCR反应混合液
组分 | 体积(µl/rxn) | 终浓度 |
2×SYBR Green qPCR预混液 | 10 | 1× |
模板 | 可变 | 1-100ng |
正向引物(5µM) | 1 | 0.2-1µM |
反向引物(5µM) | 1 | 0.2-1µM |
Rox reference Dye(50×) | 按仪器需要 | 1× |
dH2O | 至终体积20 | - |
总体积 | 20 | - |
2. qPCR程序设定
本试剂盒可应用于两步和三步程序,三步法更好。如果扩增效率较差,则可以延长热启动时间,可以降低退火温度或增加延长时间。如果扩增特异性较差,则可以适当地提高退火温度。
二步法 | 变性 | PCR(40 cycles) | 融解曲线 (1 cycle) | |||
变性 | 退火/延申 | |||||
温度 | 95℃ | 95℃ | 60℃ | 95℃ | 60℃ | 95℃ |
时间 | 30s~10min | 15s | 30~60s | 15s | 60s | 15s |
三步法 | 变性 | PCR(40 cycles) | 融解曲线 (1 cycle) | ||||
变性 | 退火 | 延申 | |||||
温度 | 95℃ | 95℃ | 50~60℃ | 72℃ | 95℃ | 60℃ | 95℃ |
时间 | 30s~10min | 15s | 30s | 30s | 15s | 60s | 15s |
3. 结果分析
扩增曲线:CT值范围一般为15~35,20~28的范围较好。如果CT值过低,则增加模板的稀释率。如果CT值过高,则提高模板或引物的浓度,甚至调整qPCR程序。融解曲线:通常只有当融解曲线为单峰时,才能得到定量结果。如果在融解曲线上有多个峰,则需要优化条件,如重新设计引物。
质量指标
MSDS
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