藻红蛋白沉淀（R-PE）(溶于硫酸铵溶液)

藻红蛋白（R-Phycoerythrin, R-PE）是从红藻中分离纯化的一种荧光蛋白，是一种新荧光标记染料。因为其有强荧光，很好的吸光性能和很高的量子产率，在可见光谱区有很宽的激发及发射范围。

产品性质

分子量: 约 240,000 道尔顿

纯度: Amax/A280 > 5.5

吸收峰max: 480/565±5 nm

荧光发射峰: 575±5 nm

结构: 分子结构为通过硫醚键连接的载体蛋白与开链线性延展的四咯化合物。

藻红蛋白(R-PE)结构式

产品优势

1、在较宽的PH范围内具有较宽的吸收光谱，比较容易选择合适的激发波长，从而得到荧光发射，且激发时有特异的荧光发射峰；

2、吸光度和荧光量子产率很高，荧光强而稳定，灵敏度高；

3、具有较小的荧光背景，不易淬灭，荧光保存期较长；

4、水溶性好，易与其他分子交联结合，非特异性吸附少；

应用领域

1、作为荧光探针标记抗体，生物素和链霉亲和素或其他蛋白，用于免疫荧光、免疫组化、流式细胞术及活体成像实验。

2、有研究表明藻红蛋白是一种新的无其它副作用的光敏物质。

3、藻红蛋白作为一种天然色素并且无其它副作用。

藻红蛋白（R-PE)标记抗体的步骤

1、藻红蛋白的预处理

藻红蛋白冻干粉用纯化水溶解，浓度调整到 5-10 毫克/毫升为宜。

2、藻红蛋白的衍生化

将琥珀酰亚胺-4-(N-甲基马来酰亚胺)环已烷-1-碳酸酯)(SMCC)溶解于无水二甲基亚砜（DMSO）配制成 10毫克/毫升的母液，每毫克的藻红蛋白添加11微升的琥珀酰亚胺-4-(N-甲基马来酰亚胺)环已烷-1- 碳酸酯)(SMCC)，铝箔封好后于室温旋转反应60分钟，使藻红蛋白分子上的氨基与琥珀酰胺反应生成衍生化的藻红蛋白。

交换缓冲液预先平衡凝胶层析柱，将衍生化的藻红蛋白过柱，收集藻红蛋白峰。

3、抗体的处理

二硫苏糖醇（DTT）溶解于蒸馏水中，配制成1摩尔/升的二硫苏糖醇（DTT）母液，调整抗体的浓度，使其浓度至少为4毫克/毫升。

每毫升抗体溶液中加入20微升的二硫苏糖醇（DTT）母液，室温静置反应40分钟，将抗体的二硫键打开形成巯基。

交换缓冲液预先平衡凝胶柱，将反应液过柱，收集抗体部分。

4、藻红蛋白和抗体的共价交联

每毫克抗体加入3.2毫克的琥珀酰亚胺-4-(N-甲基马来酰亚胺)环已烷-1-碳酸酯)(SMCC)衍生化的藻红 蛋白，铝箔封好后于室温旋转反应60分钟，使藻红蛋白分子上的马来酰亚胺基和抗体上的巯基实现共价交联。

10毫克的N-乙基马来酰胺（NEM）溶解于1.0毫升的无水二甲基亚砜（DMSO）中制成N-乙基马来酰胺（NEM）母液（现配现用）。

每毫克抗体中加入3.4微升N-乙基马来酰胺（NEM）母液，铝箔封好后于室温旋转反应60分钟，反应后，使抗体上的巯基封闭。

5、交联物的存储

将交联物于存储缓冲液中透析后保存于2-8℃。