5-溴-4-氯-3-吲哚基-β-D-吡喃半乳糖苷(X-Gal)

X-Gal是β-半乳糖苷酶的发色底物，可产生丰富的蓝色，与背景相比可以直观地检测到。 X-Gal是lac+基因型重组细菌菌落蓝白斑筛选的良好基质。

X–gal是β–半乳糖苷酶（β–galactosidase）的底物，水解后呈蓝色。基于这个特点，pUC系列载体DNA（或其他带有lacZ基因载体DNA）以lacZ 缺失细胞为宿主进行转化时、或用M13噬菌体载体DNA进行转染时，如果在平板培养基中加入X–gal和IPTG，由于β–半乳糖苷酶的α–互补性，可以根据是否呈现白色菌落（或噬菌斑）而方便地挑选出基因重组体。

使用方法

首先把X-gal配制成20 mg/ml的二甲基甲酰胺（DMF）溶液（-20℃避光保存），然后在100 ml的琼脂培养基中，加入200 μl的上述溶液、100 μl的IPTG（24 mg/ml）和100 μl的Amp（100 mg/ml），制作成X-gal、IPTG、Amp平板培养基。当DNA片段插入至pUC系列载体（或其他带有lacZ、Amp基因载体），然后转化至lacZ缺失细胞中后，涂布上述的X–gal、IPTG、Amp平板培养基，可根据长出菌体的蓝白色，而方便地挑选出基因重组体（白色为具有DNA插入片段的基因重组体）。

注意事项

1. 培养噬菌体时，Top agar中的添加量为：50 μl/3 ml（20mg/ml）。
2. 含有X-gal的培养基4℃避光保存，须在1~2周内使用。

参考文献

1. V.A. Matei等.    Near-infrared laser illumination transforms the fluorescence absorbing X-Gal reaction product BCI into a transparent, yet brightly fluorescent substance． 《 es 》 ， 2006
2. Sally F Burn.    Detection of β-galactosidase activity: X-gal staining.． 《 Methods Mol Biol 》 ， 2012
3. Schatz， Omri等.    Clearing and photography of whole mount X-gal stained mouse embryos． 《 Informa plc 》 ， 2005
4. Sally F. Burn.    Detection of 尾-Galactosidase Activity: X-gal Staining． 2012
5. Su MT等.    X-gal staining of Drosophila embryos compatible with antibody staining or in situ hybridization.． 《 Biotechniques 》 ， 1998