大家好,我是蛋白工具酶家族的新成员,我的名字叫“重组烟草蚀纹病毒蛋白酶(rTEV Protease)”,今天跟大家做个自我介绍:
产品描述
重组TEV蛋白酶(rTEV Protease)经过基因工程改造,在大肠杆菌中重组表达,带His标签(6X His tag),不仅保持天然TEV酶的功能活性,且在广谱的温度范围内表现出更强的稳定性和特异性。rTEVProtease是一种用来切除融合蛋白上标签序列的常用工具酶,较EK、SUMO等蛋白酶的位点专一性更强,具有高活性和高特异性的特点。
品牌
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货号
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包装规格
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比活
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Seebio®
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EBY3644A-1KU
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酶:1×1KU、Buffer:1×1.5ml
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1U/μL
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Seebio®
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EBY3644A-5KU
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酶:1×5KU、Buffer:2×1.5ml
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5U/μL
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Seebio®
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EBY3644A-10KU
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酶:2×5KU、Buffer:4×1.5ml
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5U/μL
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产品特点
严格识别七氨基酸序列EXXYXQ↓(G/S),切割位点在谷氨酰胺和甘氨酸/丝氨酸之间。其序列专一性远比凝血酶、因子xa、肠激酶等蛋白酶高。TEV蛋白酶可在广泛pH(6.0-8.5)和温度(4-30℃)内进行酶切,使得反应条件的选择可根据目的蛋白的情况而灵活变动。rTEV酶在pH 7.0,30℃时可达到最佳活性。
产品应用
用于切除重组蛋白的融合标签。rTEV酶的N端含有6×His,酶切结束后可以通过Ni2+亲和层方便地去除rTEV,以达到纯化目的蛋白的目的。
产品属性
来源(Source)
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大肠杆菌重组表达
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外观(Appearance)
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无色透明液体
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分子量
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27.8kDa
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比活力(Specific Activity)
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1U/μL1 5U/μL
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活性定义(Unit Definition)
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在1×rTEV Buffer(50 mM Tris,pH 8.0,0.1 mM EDTA,1 mM DTT)中,30℃反应1 h,剪切>85%的3 μg底物所需要的酶量定义为一个活性单位。
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纯化(Purification)
|
色谱纯化
|
纯度(Purity)
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≥95%(by SDS-PAGE)
|
产品组成
|
25mM Tris-HCl,150mM NaCl,1mM EDTA,5mM DTT, 50%(v/v)Glycerol, pH8.0。
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表1. 不同温度下rTEV酶切活性
反应时间(h)
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不同温度下剪切活性(%)
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4℃
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16℃
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21℃
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30℃
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1
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34
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58
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56
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70
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2
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58
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80
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78
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90
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3
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71
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99
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99
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99
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3.5
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84
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99
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99
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99
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应用举例
组分
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用量
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融合蛋白
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30μg
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rTEV Protease (1 U/μL)
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10μL
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rTEV buffer(10×)
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10μL
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ddH2O
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随终体积变动
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1.按如上表格配制反应体系。
2.混匀后在30℃条件下温育,分别在1h、2h、4h、6h后取样,置于单独的EP管中。
3.向上述EP管中加入适量的 5×SDS Loading Buffer,-20℃保存至酶切完成。
4.取酶切样品进行SDS-PAGE电泳分析,确定酶切效果,调整所需的合适酶量和反应时间。
5.如果目的蛋白在30℃不稳定,可以于4℃反应过夜(16小时左右)。
2.混匀后在30℃条件下温育,分别在1h、2h、4h、6h后取样,置于单独的EP管中。
3.向上述EP管中加入适量的 5×SDS Loading Buffer,-20℃保存至酶切完成。
4.取酶切样品进行SDS-PAGE电泳分析,确定酶切效果,调整所需的合适酶量和反应时间。
5.如果目的蛋白在30℃不稳定,可以于4℃反应过夜(16小时左右)。
运输与保存
低温运输,-20℃保存,有效期≥2年。
影响天然TEV酶活性的常见因素:
1)PMSF和AEBSF(1 mM),TLCK(1 mM),Bestatin(1 mg/mL),EDTA(1 mM),PestatinA(1 mM)以及E-64(3 mg/mL),以上这些蛋白酶抑制剂对rTEV的活性没有影响;
2)Zn2+浓度(>5 mM)对rTEV活性有抑制作用;
3)与半胱氨酸反应的试剂,也是rTEV的潜在抑制剂。
常见问题
Q:该产品有何优点?
A:重组型TEV 蛋白酶(rTEV)是经过基因工程改造和纯化后的重组蛋白酶,不仅有天然 TEV 酶活性,同时不会出现天然TEV酶的自我酶解问题,在广谱的温度范围内表现出更强的稳定性和特异性。
A:重组型TEV 蛋白酶(rTEV)是经过基因工程改造和纯化后的重组蛋白酶,不仅有天然 TEV 酶活性,同时不会出现天然TEV酶的自我酶解问题,在广谱的温度范围内表现出更强的稳定性和特异性。
Q:该产品可用于什么实验?、
A:rTEV 是一种用来切除融合蛋白上亲和标签的常用工具酶,具有很强的位点特异性。
A:rTEV 是一种用来切除融合蛋白上亲和标签的常用工具酶,具有很强的位点特异性。
Q:该产品的最适酶切时间和温度是多少?
A:16-30℃下反应 3-3.5h 最好。
A:16-30℃下反应 3-3.5h 最好。
特别推荐
Seebio® TEV 蛋白酶(TEV Protease)活性测定试剂盒(荧光法)
货号
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中文名称
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包装规格
|
EKM0101B-50T
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Seebio® TEV 蛋白酶(TEV Protease)活性测定试剂盒(荧光法)
|
50T
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货号
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中文名称
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包装规格
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ECL0019H-10mg
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重组蛋白A(rProtein A)-层析填料专用
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10mg
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ECL0019H-100mg
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重组蛋白A(rProtein A)-层析填料专用
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100mg
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ECL0019H-1g
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重组蛋白A(rProtein A)-层析填料专用
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1g
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ECL0019H-1kg
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重组蛋白A(rProtein A)-层析填料专用
|
1Kg
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重组肠激酶
货号
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中文名称
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包装规格
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ECE1123A
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重组肠激酶
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100U
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ECE0616D-1KU
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凝血酶
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1KU(2000U/mg)
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AJL0940C
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Seebio® 线性聚乙烯亚胺(PEI 40,000)
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10mg
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大家好,我是蛋白工具酶家族的新成员,我的名字叫“重组烟草蚀纹病毒蛋白酶(rTEV Protease)”,今天跟大家做个自我介绍:
产品描述
重组TEV蛋白酶(rTEV Protease)经过基因工程改造,在大肠杆菌中重组表达,带His标签(6X His tag),不仅保持天然TEV酶的功能活性,且在广谱的温度范围内表现出更强的稳定性和特异性。rTEVProtease是一种用来切除融合蛋白上标签序列的常用工具酶,较EK、SUMO等蛋白酶的位点专一性更强,具有高活性和高特异性的特点。
品牌
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货号
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包装规格
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比活
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Seebio®
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EBY3644A-1KU
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酶:1×1KU、Buffer:1×1.5ml
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1U/μL
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Seebio®
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EBY3644A-5KU
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酶:1×5KU、Buffer:2×1.5ml
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5U/μL
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Seebio®
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EBY3644A-10KU
|
酶:2×5KU、Buffer:4×1.5ml
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5U/μL
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产品特点
严格识别七氨基酸序列EXXYXQ↓(G/S),切割位点在谷氨酰胺和甘氨酸/丝氨酸之间。其序列专一性远比凝血酶、因子xa、肠激酶等蛋白酶高。TEV蛋白酶可在广泛pH(6.0-8.5)和温度(4-30℃)内进行酶切,使得反应条件的选择可根据目的蛋白的情况而灵活变动。rTEV酶在pH 7.0,30℃时可达到最佳活性。
产品应用
用于切除重组蛋白的融合标签。rTEV酶的N端含有6×His,酶切结束后可以通过Ni2+亲和层方便地去除rTEV,以达到纯化目的蛋白的目的。
产品属性
来源(Source)
|
大肠杆菌重组表达
|
外观(Appearance)
|
无色透明液体
|
分子量
|
27.8kDa
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比活力(Specific Activity)
|
1U/μL1 5U/μL
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活性定义(Unit Definition)
|
在1×rTEV Buffer(50 mM Tris,pH 8.0,0.1 mM EDTA,1 mM DTT)中,30℃反应1 h,剪切>85%的3 μg底物所需要的酶量定义为一个活性单位。
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纯化(Purification)
|
色谱纯化
|
纯度(Purity)
|
≥95%(by SDS-PAGE)
|
产品组成
|
25mM Tris-HCl,150mM NaCl,1mM EDTA,5mM DTT, 50%(v/v)Glycerol, pH8.0。
|
表1. 不同温度下rTEV酶切活性
反应时间(h)
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不同温度下剪切活性(%)
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4℃
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16℃
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21℃
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30℃
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1
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58
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78
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90
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3
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71
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99
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99
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99
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3.5
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84
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99
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99
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99
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应用举例
组分
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用量
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融合蛋白
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30μg
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rTEV Protease (1 U/μL)
|
10μL
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rTEV buffer(10×)
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10μL
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ddH2O
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随终体积变动
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1.按如上表格配制反应体系。
2.混匀后在30℃条件下温育,分别在1h、2h、4h、6h后取样,置于单独的EP管中。
3.向上述EP管中加入适量的 5×SDS Loading Buffer,-20℃保存至酶切完成。
4.取酶切样品进行SDS-PAGE电泳分析,确定酶切效果,调整所需的合适酶量和反应时间。
5.如果目的蛋白在30℃不稳定,可以于4℃反应过夜(16小时左右)。
2.混匀后在30℃条件下温育,分别在1h、2h、4h、6h后取样,置于单独的EP管中。
3.向上述EP管中加入适量的 5×SDS Loading Buffer,-20℃保存至酶切完成。
4.取酶切样品进行SDS-PAGE电泳分析,确定酶切效果,调整所需的合适酶量和反应时间。
5.如果目的蛋白在30℃不稳定,可以于4℃反应过夜(16小时左右)。
运输与保存
低温运输,-20℃保存,有效期≥2年。
影响天然TEV酶活性的常见因素:
1)PMSF和AEBSF(1 mM),TLCK(1 mM),Bestatin(1 mg/mL),EDTA(1 mM),PestatinA(1 mM)以及E-64(3 mg/mL),以上这些蛋白酶抑制剂对rTEV的活性没有影响;
2)Zn2+浓度(>5 mM)对rTEV活性有抑制作用;
3)与半胱氨酸反应的试剂,也是rTEV的潜在抑制剂。
常见问题
Q:该产品有何优点?
A:重组型TEV 蛋白酶(rTEV)是经过基因工程改造和纯化后的重组蛋白酶,不仅有天然 TEV 酶活性,同时不会出现天然TEV酶的自我酶解问题,在广谱的温度范围内表现出更强的稳定性和特异性。
A:重组型TEV 蛋白酶(rTEV)是经过基因工程改造和纯化后的重组蛋白酶,不仅有天然 TEV 酶活性,同时不会出现天然TEV酶的自我酶解问题,在广谱的温度范围内表现出更强的稳定性和特异性。
Q:该产品可用于什么实验?、
A:rTEV 是一种用来切除融合蛋白上亲和标签的常用工具酶,具有很强的位点特异性。
A:rTEV 是一种用来切除融合蛋白上亲和标签的常用工具酶,具有很强的位点特异性。
Q:该产品的最适酶切时间和温度是多少?
A:16-30℃下反应 3-3.5h 最好。
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特别推荐
Seebio® TEV 蛋白酶(TEV Protease)活性测定试剂盒(荧光法)
货号
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中文名称
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中文名称
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重组肠激酶
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100U
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Seebio® 线性聚乙烯亚胺(PEI 40,000)
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