1.项目背景
糖链抗原(carbohydrate antigen 19-9，CA19-9)是一种粘蛋白型的糖类蛋白肿瘤标志物，为细胞膜上的糖脂质，因由鼠单克隆抗体116NS19-9识别而命名。是迄今报道的对胰腺癌敏感性最高的标志物。在血清中它以唾液粘蛋白形式存在，分布于正常胎儿胰腺、胆囊、肝、肠和正常成年人胰腺、胆管上皮等处。是存在于血液循环的胃肠道肿瘤相关抗原。
《中国胰腺癌诊治指南（2021）》指出：血清 CA19-9 是目前最常用的胰腺癌诊断标记物，其诊断胰腺癌的敏感度为79%～81%，特异度为82%～90%。由于CA19-9 在胆道梗阻及感染状态下亦可异常升高，故应在黄疸缓解、炎症控制后再对其进行基线检测。血清CA19-9水平可在一定程度上反映肿瘤负荷或提示有微转移灶的可能。除诊断意义外，CA19-9还有助于评估预后及疗效。胰腺癌病人术后血清CA19-9 水平升高虽可提示复发或转移，但仍应结合影像学证据等进行综合判断。约10%的胰腺癌病人为Lewis抗原阴性血型结构，此类病人不表达CA19-9，须结合其他肿瘤标记物协助诊断。癌胚抗原诊断胰腺癌的特异度与 CA19-9 类似，但敏感度仅为44.2%。CA125升高与胰腺癌术后早期远处转移相关，一定程度上反映出肿瘤转移潜能及其相关负荷，特别对CA19-9表达阴性的胰腺癌病人，CA125具有一定的预后评估价值。其他临床常用的肿瘤标记物还有 CA50、CA242、CA724等，联合应用有助于提高诊断敏感度和特异度，但仍需高级别证据支持。
2. 性能表现（化学发光（吖啶酯）平台）
2.1 抗体配对组合：
糖链抗原CA19-9（货号：EKY0018N）包被羧基磁珠+糖链抗原CA19-9（货号：EKY0018O）标记吖啶酯；
2.2 具体指标
参考《YY/T 1178-2010 糖链抗原CA19-9定量测定试剂（盒）（化学发光免疫分析法）》
a. 最低检出限：不高于2.0U/mL。
用零浓度校准品或样本稀释液作为样本进行检测，重复测定20次，得出20次测量结果的RLU值(相对发光值)，计算其平均值(M)和标准差(sD)，得出M+2SD，根据零浓度校准品和相邻校准品之间的浓度一RLU值结果进行两点回归拟合得出一次方程，将M+2SD的RLU值带入上述方程中，求出对应的浓度值，即为最低检测限。
| CA19-9 最低检出限 | ||
空白样本（n=20） | 发光值 | |
1 | 2607 | |
2 | 2316 | |
3 | 2371 | |
4 | 2353 | |
5 | 2414 | |
6 | 2468 | |
7 | 2299 | |
8 | 2670 | |
9 | 2189 | |
10 | 2556 | |
11 | 2221 | |
12 | 2358 | |
13 | 2429 | |
14 | 2290 | |
15 | 2304 | |
16 | 2374 | |
17 | 2317 | |
18 | 2384 | |
19 | 2285 | |
20 | 2267 | |
Mean | 2374 | |
SD | 123.6 | |
M+2SD | 2621 | |
10.6 U/mL | 1 | 32734 |
2 | 31390 | |
3 | 30977 | |
Mean | 31700 | |
最低检出限 U/mL | 0.07 | |
b. 重复性：分别为2.9%及2.8%。
用 40U/mL±8U/mL和 150U/mL±30U/mL的样本各重复检测10次，计算10次测量结果的平均值M和标准差SD，根据公式CV=SD/M*100％得出变异系数CV。其变异系数(CV)应不大于10％(仪器自动操作法)或不大于15％(手工操作法)。
CA19-9 重复性 | ||||
序号 | 发光值 | 浓度值U/mL | 发光值 | 浓度值U/mL |
1 | 112817 | 40.73 | 490445 | 174.91 |
2 | 112570 | 40.64 | 488938 | 174.38 |
3 | 105906 | 38.24 | 497560 | 177.43 |
4 | 111795 | 40.36 | 478194 | 170.57 |
5 | 110967 | 40.06 | 472592 | 168.59 |
6 | 109292 | 39.46 | 488909 | 174.37 |
7 | 104306 | 37.66 | 469210 | 167.39 |
8 | 109133 | 39.40 | 477034 | 170.16 |
9 | 105000 | 37.91 | 451853 | 161.25 |
10 | 110520 | 39.90 | 491164 | 175.17 |
M | 109230.6 | 39.44 | 480589.9 | 171.42 |
SD | 3135.5 | 1.1 | 13636.1 | 4.8 |
CV | 2.9% | 2.9% | 2.8% | 2.8% |
c. 线性范围：1 U/mL-1000 U/mL。
将接近线性范围上限的高值样本按一定比例稀释为至少5种浓度，其中低值浓度的样本须接近线性范围的下限。按试剂(盒)说明书进行操作，每一浓度重复检测2次，计算平均值，将结果平均值和稀释比例用最小二乘法进行直线拟合，并计算线性相关系数r。
线性范围上限不应低于参考值的5倍，下限应低于参考值的1/5（参考罗氏CA19-9参考值为27 U/mL (第95百分位数)、34 U/mL (第97.5百分位数)、39 U/mL (第99百分位数)）。在生产企业所规定的线性范围内，试剂(盒)的相关系数r应≥0.99。
CA19-9 线性 | ||
线性 | 实测值均值U/mL | 理论值U/mL |
线性1 | 1.60 | 0.91 |
线性2 | 4.95 | 3.64 |
线性3 | 19.28 | 14.57 |
线性4 | 73.82 | 58.29 |
线性5 | 264.28 | 233.17 |
线性6 | 932.67 | 932.67 |
线性相关系数r | 0.9994 | |
d. 回收率：98.3%。
将浓度约为200U/mL(允许偏差为±20％)的糖链抗原CA19-9样品(A)加入血清或其他相应的基质样品B中，所加入A的体积宜不超过总体积（A+B）的10%。
回收率应在(85％～115%)范围内。
序号 | 混合样本U/mL | 低值样本U/mL | 高值样本U/mL |
1 | 37.58 | 23.04 | 174.91 |
2 | 37.04 | 22.11 | 174.38 |
3 | 37.87 | 22.33 | 177.43 |
均值 | 37.50 | 22.49 | 175.57 |
回收率 | 98.3% | ||
3.临床相关性（化学发光（吖啶酯）平台）
西宝生物发光平台CA19-9抗体配对与Roche CA19-9试剂赋值的临床样本（高值部分）相关性R²>0.95，相关性良好；低值部分（≤100 U/mL）相关性R²>0.95，相关性同样较好。
4.测试方案
特别注明：
1）若客户采用吖啶酯体系，建议CA19-9抗体与吖啶酯的标记摩尔比在1:4左右；
2）若客户采用碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶体系，建议优化酶与抗体标记的摩尔比例。
待测样本:加样量20ul；
试剂1：糖链抗原CA19-9（货号：EKY0018N）-磁珠稀释物，用量50ul/测试；
试剂2：糖链抗原CA19-9（货号：EKY0018O）-吖啶酯稀释物，用量50ul/测试；
反应条件：
第一步：20ul样本+50ul试剂1混合，37℃孵育9min，清洗；
第二步：加入50ul试剂2混合，37℃孵育9min，清洗；
第三步：加入预激发液及激发液，进行测试。
测试使用发光仪器:科斯迈SMART 500S；可适用于各类吖啶酯体系的化学发光仪器（如四川迈克、深圳亚辉龙、山东康华生物、基蛋生物、南京诺尔曼等）
5.产品信息(可提供大包装试剂)
产品名称 | 货号 | 推荐配对 |
糖链抗原CA19-9单克隆抗体 | EKY0018N | 糖链抗原CA19-9（货号：EKY0018N）包被羧基磁珠+糖链抗原CA19-9（货号：EKY0018O）标记吖啶酯（抗体配对组合） |
糖链抗原CA19-9单克隆抗体 | EKY0018O | |
糖链抗原CA19-9抗体（货号：eky 0018N）-羧基磁珠浓缩液 | DKY1318A | |
糖链抗原CA19-9抗体（货号：EKY0018O）-吖啶酯浓缩液 | DKY1318B | |
羧基磁珠(超顺磁)，1um | DEG0091B-1-100mg | |
羧基磁珠(超顺磁)，3um | DEG0091A-3-100mg |
1.项目背景
糖链抗原(carbohydrate antigen 19-9，CA19-9)是一种粘蛋白型的糖类蛋白肿瘤标志物，为细胞膜上的糖脂质，因由鼠单克隆抗体116NS19-9识别而命名。是迄今报道的对胰腺癌敏感性最高的标志物。在血清中它以唾液粘蛋白形式存在，分布于正常胎儿胰腺、胆囊、肝、肠和正常成年人胰腺、胆管上皮等处。是存在于血液循环的胃肠道肿瘤相关抗原。
《中国胰腺癌诊治指南（2021）》指出：血清 CA19-9 是目前最常用的胰腺癌诊断标记物，其诊断胰腺癌的敏感度为79%～81%，特异度为82%～90%。由于CA19-9 在胆道梗阻及感染状态下亦可异常升高，故应在黄疸缓解、炎症控制后再对其进行基线检测。血清CA19-9水平可在一定程度上反映肿瘤负荷或提示有微转移灶的可能。除诊断意义外，CA19-9还有助于评估预后及疗效。胰腺癌病人术后血清CA19-9 水平升高虽可提示复发或转移，但仍应结合影像学证据等进行综合判断。约10%的胰腺癌病人为Lewis抗原阴性血型结构，此类病人不表达CA19-9，须结合其他肿瘤标记物协助诊断。癌胚抗原诊断胰腺癌的特异度与 CA19-9 类似，但敏感度仅为44.2%。CA125升高与胰腺癌术后早期远处转移相关，一定程度上反映出肿瘤转移潜能及其相关负荷，特别对CA19-9表达阴性的胰腺癌病人，CA125具有一定的预后评估价值。其他临床常用的肿瘤标记物还有 CA50、CA242、CA724等，联合应用有助于提高诊断敏感度和特异度，但仍需高级别证据支持。
2. 性能表现（化学发光（吖啶酯）平台）
2.1 抗体配对组合：
糖链抗原CA19-9（货号：EKY0018N）包被羧基磁珠+糖链抗原CA19-9（货号：EKY0018O）标记吖啶酯；
2.2 具体指标
参考《YY/T 1178-2010 糖链抗原CA19-9定量测定试剂（盒）（化学发光免疫分析法）》
a. 最低检出限：不高于2.0U/mL。
用零浓度校准品或样本稀释液作为样本进行检测，重复测定20次，得出20次测量结果的RLU值(相对发光值)，计算其平均值(M)和标准差(sD)，得出M+2SD，根据零浓度校准品和相邻校准品之间的浓度一RLU值结果进行两点回归拟合得出一次方程，将M+2SD的RLU值带入上述方程中，求出对应的浓度值，即为最低检测限。
| CA19-9 最低检出限 | ||
空白样本（n=20） | 发光值 | |
1 | 2607 | |
2 | 2316 | |
3 | 2371 | |
4 | 2353 | |
5 | 2414 | |
6 | 2468 | |
7 | 2299 | |
8 | 2670 | |
9 | 2189 | |
10 | 2556 | |
11 | 2221 | |
12 | 2358 | |
13 | 2429 | |
14 | 2290 | |
15 | 2304 | |
16 | 2374 | |
17 | 2317 | |
18 | 2384 | |
19 | 2285 | |
20 | 2267 | |
Mean | 2374 | |
SD | 123.6 | |
M+2SD | 2621 | |
10.6 U/mL | 1 | 32734 |
2 | 31390 | |
3 | 30977 | |
Mean | 31700 | |
最低检出限 U/mL | 0.07 | |
b. 重复性：分别为2.9%及2.8%。
用 40U/mL±8U/mL和 150U/mL±;30U/mL的样本各重复检测10次，计算10次测量结果的平均值M和标准差SD，根据公式CV=SD/M*100％得出变异系数CV。其变异系数(CV)应不大于10％(仪器自动操作法)或不大于15％(手工操作法)。
CA19-9 重复性 | ||||
序号 | 发光值 | 浓度值U/mL | 发光值 | 浓度值U/mL |
1 | 112817 | 40.73 | 490445 | 174.91 |
2 | 112570 | 40.64 | 488938 | 174.38 |
3 | 105906 | 38.24 | 497560 | 177.43 |
4 | 111795 | 40.36 | 478194 | 170.57 |
5 | 110967 | 40.06 | 472592 | 168.59 |
6 | 109292 | 39.46 | 488909 | 174.37 |
7 | 104306 | 37.66 | 469210 | 167.39 |
8 | 109133 | 39.40 | 477034 | 170.16 |
9 | 105000 | 37.91 | 451853 | 161.25 |
10 | 110520 | 39.90 | 491164 | 175.17 |
M | 109230.6 | 39.44 | 480589.9 | 171.42 |
SD | 3135.5 | 1.1 | 13636.1 | 4.8 |
CV | 2.9% | 2.9% | 2.8% | 2.8% |
c. 线性范围：1 U/mL-1000 U/mL。
将接近线性范围上限的高值样本按一定比例稀释为至少5种浓度，其中低值浓度的样本须接近线性范围的下限。按试剂(盒)说明书进行操作，每一浓度重复检测2次，计算平均值，将结果平均值和稀释比例用最小二乘法进行直线拟合，并计算线性相关系数r。
线性范围上限不应低于参考值的5倍，下限应低于参考值的1/5（参考罗氏CA19-9参考值为27 U/mL (第95百分位数)、34 U/mL (第97.5百分位数)、39 U/mL (第99百分位数)）。在生产企业所规定的线性范围内，试剂(盒)的相关系数r应≥0.99。
CA19-9 线性 | ||
线性 | 实测值均值U/mL | 理论值U/mL |
线性1 | 1.60 | 0.91 |
线性2 | 4.95 | 3.64 |
线性3 | 19.28 | 14.57 |
线性4 | 73.82 | 58.29 |
线性5 | 264.28 | 233.17 |
线性6 | 932.67 | 932.67 |
线性相关系数r | 0.9994 | |
d. 回收率：98.3%。
将浓度约为200U/mL(允许偏差为±20％)的糖链抗原CA19-9样品(A)加入血清或其他相应的基质样品B中，所加入A的体积宜不超过总体积（A+B）的10%。
回收率应在(85％～115%)范围内。
序号 | 混合样本U/mL | 低值样本U/mL | 高值样本U/mL |
1 | 37.58 | 23.04 | 174.91 |
2 | 37.04 | 22.11 | 174.38 |
3 | 37.87 | 22.33 | 177.43 |
均值 | 37.50 | 22.49 | 175.57 |
回收率 | 98.3% | ||
3.临床相关性（化学发光（吖啶酯）平台）
西宝生物发光平台CA19-9抗体配对与Roche CA19-9试剂赋值的临床样本（高值部分）相关性R²>0.95，相关性良好；低值部分（≤100 U/mL）相关性R²>0.95，相关性同样较好。
4.测试方案
特别注明：
1）若客户采用吖啶酯体系，建议CA19-9抗体与吖啶酯的标记摩尔比在1:4左右；
2）若客户采用碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶体系，建议优化酶与抗体标记的摩尔比例。
待测样本:加样量20ul；
试剂1：糖链抗原CA19-9（货号：EKY0018N）-磁珠稀释物，用量50ul/测试；
试剂2：糖链抗原CA19-9（货号：EKY0018O）-吖啶酯稀释物，用量50ul/测试；
反应条件：
第一步：20ul样本+50ul试剂1混合，37℃孵育9min，清洗；
第二步：加入50ul试剂2混合，37℃孵育9min，清洗；
第三步：加入预激发液及激发液，进行测试。
测试使用发光仪器:科斯迈SMART 500S；可适用于各类吖啶酯体系的化学发光仪器（如四川迈克、深圳亚辉龙、山东康华生物、基蛋生物、南京诺尔曼等）
5.产品信息(可提供大包装试剂)
产品名称 | 货号 | 推荐配对 |
糖链抗原CA19-9单克隆抗体 | EKY0018N | 糖链抗原CA19-9（货号：EKY0018N）包被羧基磁珠+糖链抗原CA19-9（货号：EKY0018O）标记吖啶酯（抗体配对组合） |
糖链抗原CA19-9单克隆抗体 | EKY0018O | |
糖链抗原CA19-9抗体（货号：eky 0018N）-羧基磁珠浓缩液 | DKY1318A | |
糖链抗原CA19-9抗体（货号：EKY0018O）-吖啶酯浓缩液 | DKY1318B | |
羧基磁珠(超顺磁)，1um | DEG0091B-1-100mg | |
羧基磁珠(超顺磁)，3um | DEG0091A-3-100mg |
