Seebio(R) 高活性重组碱性磷酸酶（ALP）

专题推荐 | 2024-09-03

背景介绍

碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase ,AP)是一种膜结合糖蛋白。AP在自然界中广泛分布，包括原核生物和更高的真核生物。其活性位点中包括两个锌离子和一个镁离子，这三个位点的金属离子对于酶活性至关重要。碱性磷酸酶可以水解各种单磷酸酯，并释放无机磷酸盐。1,2-二氧杂环丁烷化合物AMPPD作为一种超灵敏的碱性磷酸酶底物，在碱性磷酸酶的催化作用下，磷酸根基团水解，形成一个不稳定的中间体，自行分解后四元环断裂释放出大量能量，从而激发化学发光反应。因此磁珠-抗体偶联物与碱性磷酸酶-抗体偶联物在化学发光试剂盒中可作为固相捕获试剂和酶标试剂用于检测血清中的痕量抗原。与辣根过氧化物酶(HRP)相比，碱性磷酸酶具有稳定性和高敏感性的优势。AP在生物学尤其是分子生物学和免疫学领域有着广泛的应用。

随着酶促化学发光检测技术的发展，酶偶联抗体及其偶联方法受到广泛关注。目前常用的碱性磷酸酶偶联方法有SMCC异性双功能偶联法、过碘酸钠氧化法、碳二亚胺法和等。过碘酸钠氧化法是先将酶进行醛基化，然后和抗体偶联，这种操作比较复杂，偶联产物有效活性浓度低。碳二亚胺法利用碳二亚胺类物质对蛋白质进行羧基化，这种方法容易形成蛋白分子间的自身聚合，产生非均一性产物。SMCC异性双功能偶联法利用SMCC的异性官能团，分别连接碱性磷酸酶和抗体，这种方法相比过碘酸钠法和碳二亚胺法偶联效率高。

《BIOCONJUGATE TECHNIQUES》中介绍了部分SMCC法标记酶的原理：

a）SMCC与酶分子上的胺基反应产生马来酰亚胺活化衍生物，能够与含巯基的抗体分子偶联（如图一所示）；

b）抗体可以在其胺基上用2-亚氨基硫烷修饰，以形成与SMCC活化酶结合的巯基。衍生化酶上的马来酰亚胺基团与抗体上的硫醇反应形成硫醚键（如图二所示）。

图1 SMCC活化酶

图2 抗体活化及连接酶

西宝生物创新研发团队依托现有技术平台自主研发生产的ALP碱性磷酸酶产品，性能稳定、活性高，可完美替代进口品牌，且经众多客户的反复测评得到了大家的一致认可。此酶在化学发光平台经过多个临床项目验证，信噪比、精密度、稳定性等与进口品牌性能持平。欢迎索样测试，服务热线：400-021-8158

Seebio® 重组碱性磷酸酶产品详情

产品编号	DCE0108L
产品名称	Alkaline Phosphatase recombinant（Highly Active） Seebio® 重组碱性磷酸酶（高活性）
EC 号	3.1.3.1
Cas号	9001-78-9
来源	Bovine intestinal mucosa 小牛肠粘膜
比活	≥7000U/mg
纯度	≥96%（HPLC）
表达	CHO-K1
分子量	≈62kDa
糖基化	18±5%
外观	澄清液体
规格	5mg，25mg，100mg
浓度	14-21mg/ml（具体参考随货COA）
储存缓冲液	3MNaCl，5mMMgCl2，0.2mMZnCl2，30mMTEA，PH7.6
酶活定义	在37℃、pH 9.5条件下，一个单位的碱性磷酸酶每分钟能够水解对硝基苯酚磷酸盐（pNPP）产生1μmol对硝基苯酚（pNP）。
储存运输	Store at 2°C to 8°C. DO NOT FREEZE.

产品用途（ALP）：

Ø 在免疫系统中重组碱性磷酸酶ALP偶联到蛋白上(抗体、链霉亲和素等) ,识别目标分子（底物）;

Ø 在分子生物学系统中ALP用在DNA或RNA的5'-末端去磷酸以防止自连;

Ø 经ALP去磷酸化作用后, DNA或RNA还可被放射性标记磷酸盐标记(通过T4多核苷酸激酶) ;

Ø ALP还常用来蛋白的去磷酸化实验，比如酪蛋白和核酸等；

Seebio® 碱性磷酸酶产品优势：

u 性价比高，可直接平替进口品牌

u 包装规格灵活适合研发到生产

u 精密度、信噪比良好

u 比活性高，性能优异

Seebio® 碱性磷酸酶与进口R品牌-2103 ALP酶性能对比（实测案例）

1.1 ALP标记IL-6项目（SMCC法）

分别采用进口R品牌-2103 ALP酶及西宝自产三个批次ALP酶（货号：DCE0108L）标记人白介素6（IL-6）抗体（货号：EKY0129D），搭配磁珠（货号：DEG0814A）包被人白介素6（IL-6）抗体1（货号：EKY0129Z）测试40例临床样本（罗氏IL-6电化学发光试剂盒赋值）及测试精密度。

由表1数据可知，进口R品牌-2103 ALP酶标记IL-6抗体及西宝三个批次ALP酶标记IL-6抗体测试临床相关性r分别为0.996、0.998、0.997、0.997，表明西宝三个批次ALP酶标记IL-6抗体测试临床相关性良好；此外，西宝三个批次ALP酶分别与进口R品牌-2103 ALP酶测试IL-6样本的平均偏差分别为4.9%、3.7%、6.8%，表明西宝三个批次ALP酶与进口R品牌-2103 ALP酶差异很小。

由表2数据可知，进口R品牌-2103 ALP酶标记IL-6抗体及西宝三个批次ALP酶标记IL-6抗体测试IL-6样本精密度分别为1.6%、1.1%、2.4%、2.0%，表明西宝三个批次ALP酶标记IL-6抗体测试临床样本精密度良好。

表1 进口R品牌-2103 ALP酶与西宝ALP测试IL-6临床样本数据

序号	临床样本结果 pg/mL	进口R品牌-2103 ALP酶发光值	西宝ALP酶批次1发光值	西宝ALP酶批次1与进口R品牌 ALP酶发光值偏差	西宝ALP酶批次2发光值	西宝ALP酶批次2与进口R品牌 ALP酶发光值偏差	西宝ALP酶批次3发光值	西宝ALP酶批次3与进口R品牌ALP酶发光值偏差
1	3.5	16454	16292	-1.0%	15757	-4.2%	15807	-3.9%
2	8	78293	78589	0.4%	79500	1.5%	79781	1.9%
3	9.9	54224	53352	-1.6%	52407	-3.4%	52404	-3.4%
4	22	86209	87244	1.2%	83819	-2.8%	86418	0.2%
5	37.5	147872	149135	0.9%	149388	1.0%	149391	1.0%
6	93.1	560502	580377	3.5%	577876	3.1%	586633	4.7%
7	124	716900	745133	3.9%	738282	3.0%	777282	8.4%
8	172	998616	1054358	5.6%	1055302	5.7%	1064425	6.6%
9	265	1386708	1428782	3.0%	1455081	4.9%	1490701	7.5%
10	335	1614700	1737159	7.6%	1760949	9.1%	1816254	12.5%
11	420	2361064	2408001	2.0%	2397694	1.6%	2423464	2.6%
12	480	2443803	2769192	13.3%	2779887	13.8%	2955628	20.9%
13	501	3125606	3118765	-0.2%	3122118	-0.1%	3144256	0.6%
14	628	3855067	3913636	1.5%	3907211	1.4%	4020092	4.3%
15	696	4017892	4122175	2.6%	4096585	2.0%	4280100	6.5%
16	701	4083067	4247255	4.0%	4344028	6.4%	4400938	7.8%
17	726	4225532	4469107	5.8%	4495679	6.4%	4595290	8.8%
18	730	4508639	4736976	5.1%	4797685	6.4%	4869524	8.0%
19	770	4706747	4838610	2.8%	4803327	2.1%	4860497	3.3%
20	796	3898043	3892002	-0.2%	4009443	2.9%	4016326	3.0%
21	808	5016175	5362475	6.9%	5446715	8.6%	5731708	14.3%
22	906	5093624	5583530	9.6%	5642083	10.8%	5797631	13.8%
23	917	4998220	5244388	4.9%	5264124	5.3%	5464788	9.3%
24	1006	5963813	6016913	0.9%	5936651	-0.5%	6167906	3.4%
25	1151	6280109	6929295	10.3%	6709239	6.8%	7074086	12.6%
26	1273	7262420	7531359	3.7%	7340057	1.1%	7918713	9.0%
27	1338	8032354	8319439	3.6%	8074112	0.5%	8473877	5.5%
28	1589	9207820	10237345	11.2%	10084827	9.5%	10223535	11.0%
29	1620	7897977	8791113	11.3%	8539931	8.1%	8970500	13.6%
30	1643	9436901	9831585	4.2%	9644512	2.2%	9899838	4.9%
31	1715	8221675	8973158	9.1%	8612254	4.8%	9280061	12.9%
32	2392	13014440	13814081	6.1%	13571809	4.3%	14035617	7.8%
33	2400	13186553	14322248	8.6%	14080616	6.8%	14227579	7.9%
34	2461	13943949	15052059	7.9%	13935503	-0.1%	14771469	5.9%
35	2787	14705924	15678163	6.6%	15075300	2.5%	15191596	3.3%
36	2978	16191512	17931378	10.7%	17329603	7.0%	18189724	12.3%
37	3086	15703759	16729867	6.5%	16025149	2.0%	16274521	3.6%
38	3350	18966851	19607273	3.4%	18836694	-0.7%	19794690	4.4%
39	4867	27452953	28200561	2.7%	27552238	0.4%	27967031	1.9%
40	4972	30247224	30997514	2.5%	30534998	1.0%	30018220	-0.8%
S0	稀释液	8328	8413	1.0%	8391	0.8%	8545	2.6%
S0	稀释液	8308	8379	0.9%	8282	-0.3%	8510	2.4%
	临床相关系数r	0.996	0.998	4.9%	0.997	3.7%	0.997	6.8%

表2 进口R品牌-2103 ALP酶与西宝ALP测试IL-6精密度数据

序号	临床样本结果 pg/mL	进口R品牌-2103 ALP酶发光值	西宝ALP酶批次1发光值	西宝ALP酶批次1与进口R品牌ALP酶发光值偏差	西宝ALP酶批次2发光值	西宝ALP酶批次2与进口R品牌ALP酶发光值偏差	西宝ALP酶批次3发光值	西宝ALP酶批次3与进口R品牌ALP酶发光值偏差
41	633	3845571	3949450	2.7%	3982366	3.6%	3968414	3.2%
		3917877	3974738	1.5%	3926552	0.2%	3886784	-0.8%
		3825928	3981113	4.1%	3912958	2.3%	3951069	3.3%
		3841732	3939175	2.5%	3846453	0.1%	3955463	3.0%
		3942931	3961147	0.5%	4091255	3.8%	3989053	1.2%
		3959783	3986780	0.7%	3929881	-0.8%	3997605	1.0%
		3944931	3951275	0.2%	3838714	-2.7%	3816604	-3.3%
		3976657	4081661	2.6%	3933418	-1.1%	4019027	1.1%
		3928228	4021525	2.4%	4093691	4.2%	3944612	0.4%
		4014240	3978290	-0.9%	4087308	1.8%	4116932	2.6%
	mean	3919788	3982515	1.6%	3964260	1.1%	3964556	1.2%
	SD	62723	41971		96710		79228
	CV	1.6%	1.1%		2.4%		2.0%

1.2 ALP标记PG I项目（SMCC法）

分别采用进口R品牌-2103 ALP酶及西宝自产三个批次ALP酶（货号：DCE0108L）标记胃蛋白酶原（PGI）单抗（货号：EKN0288E），搭配磁珠（货号：DEG0800C）包被胃蛋白酶原（PGI）单抗（货号：EKN0287E）测试40例临床样本（迈瑞PGI化学发光试剂盒赋值）及测试精密度。

由表3数据可知，进口R品牌-2103 ALP酶标记PGI抗体及西宝三个批次ALP酶标记PGI抗体测试临床相关性r分别为0.982、0.986、0.985、0.983，表明西宝三个批次ALP酶标记PGI抗体测试临床相关性良好；此外，西宝三个批次ALP酶分别与进口R品牌-2103 ALP酶测试PGI样本的平均偏差分别为10.3%、6.4%、10.4%，表明西宝三个批次ALP酶与进口R品牌-2103 ALP酶差异很小。

由表4数据可知，进口R品牌-2103 ALP酶标记PGI抗体及西宝三个批次ALP酶标记PGI抗体测试PGI样本精密度分别为1.5%、2.1%、1.7%、1.7%，表明西宝三个批次ALP酶标记PGI抗体测试临床样本精密度良好。

表3 进口R品牌-2103 ALP酶与西宝ALP测试PG I临床样本数据

序号	临床样本结果 ng/mL	进口R品牌-2103 ALP酶发光值	西宝ALP酶批次1发光值	西宝ALP酶批次1与进口R品牌ALP酶发光值偏差	西宝ALP酶批次2发光值	西宝ALP酶批次2与进口R品牌ALP酶发光值偏差	西宝ALP酶批次3发光值	西宝ALP酶批次3与进口R品牌ALP酶发光值偏差
1	5.92	401464	442002	10.1%	430291	7.2%	469496	16.9%
2	39.6	3199323	3973566	24.2%	3626535	13.4%	3695776	15.5%
3	40.1	3595262	3823900	6.4%	3641734	1.3%	3776956	5.1%
4	41.4	3514499	3863739	9.9%	3686566	4.9%	3723622	6.0%
5	41.65	4297406	4551157	5.9%	4600087	7.0%	4615690	7.4%
6	43.9	4247408	4696695	10.6%	4526134	6.6%	4502288	6.0%
7	48.27	5016661	5379793	7.2%	5357017	6.8%	5577085	11.2%
8	59.59	6047655	6220034	2.9%	6130743	1.4%	6271263	3.7%
9	63.07	6191726	6714552	8.4%	6581244	6.3%	6748646	9.0%
10	65.79	6678406	7725101	15.7%	7675146	14.9%	7759540	16.2%
11	71.21	7318119	8285405	13.2%	7640666	4.4%	8083979	10.5%
12	71.24	8000448	9442209	18.0%	9013869	12.7%	9280189	16.0%
13	73.62	7523106	8270218	9.9%	8000410	6.3%	8612540	14.5%
14	77.43	7069697	7590059	7.4%	7411316	4.8%	7623158	7.8%
15	79.02	8655807	9138468	5.6%	9214973	6.5%	9079234	4.9%
16	81.03	9112084	9893103	8.6%	9481555	4.1%	9737635	6.9%
17	88.62	8440563	9097967	7.8%	9076898	7.5%	9156597	8.5%
18	90.70	9263666	10081980	8.8%	9628447	3.9%	9818393	6.0%
19	91.63	10211666	11248455	10.2%	10518376	3.0%	10985503	7.6%
20	92.29	8409493	10189549	21.2%	9913156	17.9%	10509499	25.0%
21	93.38	9369800	10081835	7.6%	9600133	2.5%	10038535	7.1%
22	96.84	10267586	11289053	9.9%	10968039	6.8%	11296835	10.0%
23	104.02	10867034	11605424	6.8%	11218455	3.2%	11791388	8.5%
24	105.05	12930162	14297444	10.6%	14030865	8.5%	14766310	14.2%
25	105.16	10030385	11532333	15.0%	11516308	14.8%	11489410	14.5%
26	105.99	11789598	12471587	5.8%	11931351	1.2%	13161046	11.6%
27	107.29	11553097	13241305	14.6%	12447242	7.7%	13219430	14.4%
28	110.47	13187680	13797645	4.6%	13060039	-1.0%	14782314	12.1%
29	113.04	9946242	12346848	24.1%	11159606	12.2%	11700477	17.6%
30	113.20	11601795	12396364	6.8%	11798328	1.7%	12683563	9.3%
31	115.12	12692504	13355756	5.2%	12712097	0.2%	13411513	5.7%
32	125.01	12762964	14251816	11.7%	14607248	14.5%	14431858	13.1%
33	125.46	12915163	14274538	10.5%	13371808	3.5%	13794939	6.8%
34	129.25	13000841	14225615	9.4%	14160303	8.9%	14281469	9.9%
35	132.22	14919851	16260773	9.0%	15569348	4.4%	15752080	5.6%
36	142.24	15712824	17785424	13.2%	16700165	6.3%	17359360	10.5%
37	142.82	15512075	16673442	7.5%	16313601	5.2%	16873988	8.8%
38	148.91	16918474	17955282	6.1%	17391399	2.8%	18284928	8.1%
39	172.15	16579359	18716715	12.9%	17307071	4.4%	18262788	10.2%
40	194.97	19647477	21400145	8.9%	21268634	8.3%	22286095	13.4%
S0	稀释液	7089	7168	1.1%	6950	-2.0%	7189	1.4%
S0	稀释液	6964	7032	1.0%	6886	-1.1%	9720	39.6%
	临床相关系数r	0.982	0.986	10.3%	0.985	6.4%	0.983	10.4%

表4 罗氏ALP与西宝ALP测试PGI精密度数据

编号	临床样本结果 ng/mL	进口R品牌-2103 ALP酶发光值	西宝ALP酶批次1发光值	西宝ALP酶批次1与进口R品牌ALP酶发光值偏差	西宝ALP酶批次2发光值	西宝ALP酶批次2与进口R品牌ALP酶发光值偏差	西宝ALP酶批次3发光值	西宝ALP酶批次3与进口R品牌ALP酶发光值偏差
41	73.41	7877919	8339922	5.9%	8293208	5.3%	8726632	10.8%
		7793302	8421988	8.1%	8600608	10.4%	8652174	11.0%
		7797740	8332840	6.9%	8564956	9.8%	8446239	8.3%
		7862110	8618334	9.6%	8213756	4.5%	8278822	5.3%
		8054737	8828634	9.6%	8515124	5.7%	8751994	8.7%
		7812837	8585820	9.9%	8394207	7.4%	8577867	9.8%
		7921397	8762108	10.6%	8300025	4.8%	8516509	7.5%
		8111839	8422760	3.8%	8281807	2.1%	8662195	6.8%
		7781729	8655701	11.2%	8198664	5.4%	8505551	9.3%
		7777237	8416163	8.2%	8326847	7.1%	8475487	9.0%
	mean	7879085	8538427	8.4%	8368920	6.2%	8559347	8.6%
	SD	118004	176444		144155		144485
	CV	1.5%	2.1%		1.7%		1.7%

Seebio® 碱性磷酸酶测试其他项目性能同样良好

采用西宝ALP酶（货号：DCE0108L）分别对25-羟基维生素D（双抗夹心法）、幽门螺杆菌(HP.CagA)、胃蛋白酶原I（PGI）、D-二聚体（D-Dimer）、血栓调节蛋白（TM）、白介素-6（IL-6）、血清淀粉样蛋白A（SAA）、糖类抗原125(CA125)、肌红蛋白（Myo）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）等项目进行验证，临床效果表现良好，具体详情请参考西宝生物相关免疫诊断解决方案。

西宝生物可免费提供碱性磷酸酶ALP标记工艺（SMCC法），具体详情询Seebio相关人员

碱性磷酸酶案例验证相关核心试剂

产品名称	货号	推荐配对
胃蛋白酶原（PGI）抗体	EKN0287E	胃蛋白酶原（PGI）单抗（货号：EKN0287E）包被羧基磁珠+胃蛋白酶原（PGI）单抗（货号：EKN0288E）标记碱性磷酸酶
胃蛋白酶原（PGI）抗体	EKN0288E
胃蛋白酶原（PGI）抗原	EKY0731B	校准、质控抗原
胃蛋白酶原（PGI）单抗（货号：EKN0287E）包被羧基磁珠浓缩液	DKY1331H	浓缩液
胃蛋白酶原（PGI）单抗2（货号：EKN0288E）标记碱性磷酸酶浓缩液	DKY1331I	浓缩液
白介素-6（IL-6)抗体	EKY0129Z	白介素-6（IL-6)抗体1（货号：EKY0129Z）包被羧基磁珠+白介素-6（IL-6)抗体2（货号：EKY0129D）标记碱性磷酸酶
白介素-6（IL-6)抗体	EKY0129D
白介素6 (IL-6)重组抗原	EKY0140B	校准、质控抗原
白介素-6（IL-6)单抗1（货号：EKY0129Z）包被羧基磁珠浓缩液	DKY1321F	浓缩液
白介素-6（IL-6)单抗2（货号：EKY0129D）标记碱性磷酸酶浓缩液	DKY1321G	浓缩液

其他相关试剂订购详情：

产品编号	产品名称	订购规格
DCE0108L	Seebio® 重组碱性磷酸酶（高活性）	5mg，10mg，100mg
DCD0517B	AMPPD 发光底物液（即用型）	100ml
DEG0800C	羧基磁性微球，1.5um	10ml
DEG0814A	链霉亲和素磁性微球，1.5um	10ml
ECV0336B	生物素Biotin-NHS	50mg，100mg
EJL1164A	4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷羧酸 -N-琥珀酰亚胺酯（SMCC）	250mg
DCS0005C	4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸磺酸基琥珀酰亚胺酯钠盐（Sulfo-SMCC）	25mg
AJL0806C	2-亚氨基硫杂环戊烷盐酸盐	100mg
AJL0617A	马来酰亚胺	5g
ACP0005A	甘氨酸	500g、1kg，25kg
DCL0001A	牛血清白蛋白(第五组分)	100g，250g，500g
DCL0001B	牛血清白蛋白(第五组分,无蛋白酶)	5g，100g，500g
DCL0001D	牛血清白蛋白(第五组分,无蛋白酶,低脂肪酸)	25g，100g，500g
DCL0001S	牛血清白蛋白(第五组分)	100g，500g，1kg
DCL0001T	牛血清白蛋白(无蛋白酶，低脂肪酸，低IgG，低内毒素)	100g，1kg
AYY2828A	酪蛋白	25g，100g
ACH0027A	Tween 20	100ml，500ml，1L，5L
ACH0028A	Tween 80	100ml，500ml，1L，5L
ACH0026A	Triton X-100	100ml、500ml、1L
ACH0056D	Triton X-450	50ml，500ml
ACH0003B	聚环氧乙烯月桂酰醚,Brij-35	100g，500g，1kg
ACC0030B	三羟甲基氨基甲烷<结晶>(Tris base)	50g，100g，1kg
ACC0016A	2-(N-吗啉代)乙烷磺酸一水(MES)	100g，500g，1kg
ACC0017A	3-(N-吗啉代)丙磺酸(MOPS)	100g，1kg
ACC0013A	N-2-羟乙基哌嗪-N'-2-乙磺酸(HEPES)	25g，500g，1kg
ACN0037B	Krovin 300防腐剂	25ml，100ml，500ml，5L
ACN0917A	Krovin 360防腐剂	25ml，100ml，500ml，5L
ACN0046A	Krovin 500防腐剂	25ml，100ml，500ml，5L
ACN0043B	Krovin 950防腐剂	25ml，100ml，500ml，5L
DJL0145B	三(2-羰基乙基)磷盐酸盐（TCEP）	5g，100g，500g